稳转细胞株构建与筛选服务

    PPL质粒共享库基于其庞大的慢病毒质粒库、CART研发平台，对外提供稳转细胞株构建与筛选服务。

服务项目：
1、基因过表达、突变、敲降等稳转细胞株构建，每株≧10⁶个细胞。

2、CRISPR/Cas9基因敲除稳转细胞株构建，每株≧10⁶个细胞。

服务流程：

一、基因过表达、突变、敲降等用稳转细胞株构建。
      1、载体构建：将外源基因（CDS、突变或干扰靶点序列）构建到慢病毒载体上（荧光、筛选抗性可选）。PPL质粒库有现成模板的，免费提供。没有现成模板的，需要客户提供，或由我们另外合成，费用另计。

     2、预实验：客户提供靶细胞，我们进行靶细胞培养(特殊细胞需要客户提供培养基); 使用对照病毒感染靶细胞，测定细胞易感度; 同时筛选7天细胞全部死亡的抗生素浓度，作为筛选浓度。

3、慢病毒包装：使用合适的慢病毒包装体系，包装满足筛选要求的慢病毒滴度液。
     4、细胞感染：使用包装好的慢病毒滴度液，参考预实验感染体系感染靶细胞。
      5、抗生素筛选。

6、细胞筛选后培养放大。
     7、鉴定筛选结果：提供qPCR或WB检测验证。需要客户提供有效的WB抗体。
   二、CRISPR/Cas9基因敲除稳转细胞株构建

1、预实验：客户提供靶细胞，我们进行靶细胞培养(特殊细胞需要客户提供培养基)。

2、设计高效的sgRNA。

3、构建sgRNA/Cas9表达载体。

4、使用构建好的表达载体转染靶细胞。

5、挑选单克隆扩大培养

6、多个单克隆基因组测序。

7、选择发生变异的单克隆进行TA克隆测序。

8、挑选双敲单克隆细胞株进行验证。

9、对目标单克隆扩大培养，交付细胞株（≧3）。

相关产品：

产品类型	货号	品名	规格
慢病毒滴度液	LV00191-2e	mCherry-EGFP-LC3B(Human)慢病毒滴度液	200ul*5
慢病毒滴度液	LV50026-2c	mCherry-EGFP-LC3B(Mouse)慢病毒滴度液	200ul*5
单克隆稳转细胞系	PY0001-1	A549-mCherry-EGFP-LC3B (human)	1×10^6
单克隆稳转细胞系	PY0001-2	A549-GFP	1×10^6
单克隆稳转细胞系	PY0001-3	A549-hCD19-GFP	1×10^6
单克隆稳转细胞系	PY0002-1	K562-GFP	1×10^6
单克隆稳转细胞系	PY0002-2	K562-RFP	1×10^6
单克隆稳转细胞系	PY0002-3	K562-hEphA2-GFP	1×10^6
单克隆稳转细胞系	PY0003-1	MC38-GFP	1×10^6
单克隆稳转细胞系	PY0003-2	MC38-hEphA2-GFP	1×10^6

更多工具类稳转细胞株产品正在开发，欢迎关注咨询。

咨询热线： 021-50327163，  王炳和：13818765978（手机与微信号）

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